声明

本文是学习GB-T 25172-2020 猪常温精液生产与保存技术规范. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们

1 范围

本标准规定了猪常温精液生产与保存的基本要求和技术要求,描述了对应的试验方法,给出了保存

和运输的内容。

本标准适用于猪的常温精液生产与保存。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB 23238 种猪常温精液

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

原精液 raw semen

采集后未经稀释的精液。

3.2

常温精液 fresh semen

经稀释后在16℃~18℃下保存,仍具有受精能力的精液。

注:改写GB 23238—2009,定义3.2。

3.3

精子活力 sperm motility

在37 ℃下呈直线前进运动的精子占总精子数的百分率。

3.4

精子密度 sperm concentration

单位体积精液中的精子数。

3.5

精子畸形率 abnormal sperm percentage

畸形精子占总精子数的百分率。

4 基本要求

4.1 种公猪

应健康且达到种用要求。成年公猪宜每周采精二次至三次,青年公猪宜每周一次至二次。

GB/T 25172—2020

4.2 采精员

应经过专业培训,工作时应着洁净工作衣、帽,穿长胶鞋,戴无毒塑料手套。

4.3 采精室

应设置采精区和安全区。采精区设置假台猪,地面防滑,并保持清洁、安静和避光。

4.4 精液处理室

应设置精液检查、稀释和分装区,温度宜控制在22℃~25℃,避免太阳光直射或紫外灯照射。配

备仪器和用品参见附录 A。

4.5 稀释液

4.5.1 配制用水应符合GB/T 6682 中二级水或三级水的要求。

4.5.2 商品稀释剂按说明书使用。不得使用过期或变质稀释剂。

4.5.3 自配稀释液所用试剂应为分析纯,稀释液配方参见附录 B。

4.5.4 稀释液 pH 值应为6.8~7.2。

4.5.5 使用前1 h
配制,配制后应及时贴上标签,标明品名、配制日期和时间、经手人。

4.5.6 稀释液应密封后置于冰箱中0℃~4℃冷藏,保存时间不应超过24 h。

5 技术要求

5.1 精液采集

5.1.1 采精前准备

5.1.1.1
集精杯或保温杯(内置无毒塑料袋并覆盖四层纱布或一层精液过滤纸)、载玻片、盖玻片、精液
处理器皿应预热至37℃。

5.1.1.2
显微镜载物台恒温板应预热至37℃。精子密度仪使用前应预热。

5.1.2 采精

5.1.2.1
应剪去公猪包皮部长毛,清洁体表,擦干水渍。

5.1.2.2
应挤净包皮积液,先用0.1%高锰酸钾溶液清洗腹部和包皮,再用温水清洗后擦干。

5.1.2.3
宜用设备采精法,按使用说明书操作。手握法采精时,应一只手戴双层无毒聚乙烯手套,按摩
公猪包皮部,待公猪爬跨假台猪并伸出阴茎,脱去外层手套,握紧龟头,使其不能旋转,顺势将阴茎的
"S"状弯曲延直。另一只手持集精杯或保温杯,弃去最初射出的少量精液,收集精液至射精完毕。

5.1.2.4
采精完毕后,应标记公猪耳号,送至精液处理室。

5.2 精液检验

5.2.1 检验项目

外观、气味、采精量、精子活力、精子密度和精子畸形率。

5.2.2 原精液质量

应符合表1的规定,其中任何一项不符合要求的则废弃。

GB/T 25172—2020

表 1 原精液质量

编号

项 目

指 标

证实方法

1

外观

呈乳白色,均匀一致

目 测

2

气味

略带腥味,无异味

鼻嗅

3

采精量/mL

≥100

5.2.3.1

4

精子活力/%

≥70

5.2.3.2

5

精子密度/(10⁸个/mL)

≥1

5.2.3.3

6

精子畸形率/%

≤20

5.2.3.4

5.2.3 证实方法

5.2.3.1 采精量

采用称量法计算采精量,1 g 相当于1 mL。

5.2.3.2 精子活力

取中层精液10 μL~15μL,
在200倍~400倍显微镜下检查。每份精液取样二次,每个样观察三个

视野,计算平均值。使用自动分析仪器应按其检测方法操作。

5.2.3.3 精子密度

采用精子密度仪测定。应定期用血细胞计数板法校正。

5.2.3.4 精子畸形率

采用伊红或姬姆萨染色法检查时,在200倍~400倍显微镜下观察左、中、右三个视野中不少于200

个精子。也可采用相差显微镜直接观察。每二个月抽检一次。

5.3 精液稀释

5.3.1 精液采集后应尽快稀释,放置时间不宜超过15 min。

5.3.2
采用等温稀释。精液与稀释液温差不得超过1℃,根据精液温度调节稀释液温度,不得反向
操作。

5.3.3
将稀释液沿杯壁缓慢加入精液中,轻轻摇动或沿一个方向搅拌,混合均匀。高倍稀释时,先低倍
稀释(1:1)~(1:2),30 s 后再加入余下的稀释液。

5.3.4 稀释液总量以体积V 计,数值以毫升(mL) 表示,按式(1)计算:

式中:

style="width:2.57334in;height:0.59898in" />

……………………

(1)

i— 采精量,单位为毫升(mL);

c — 精子密度,单位为108 个每毫升(10°个/mL);

s — 每剂量中直线前进运动精子数,单位为10°个;

v₂— 剂量,单位为毫升(mL)。

5.3.5 精液稀释后应静置5 min, 按5.2.3.2检测精子活力,活力不得低于70%。

GB/T 25172—2020

5.4 精液分装

5.4.1 剂量、每剂量中直线前进运动精子数应符合GB 23238 的规定。

5.4.2
可采用袋装或瓶装,应使用对精子无毒害作用且灭菌的一次性塑料或硅胶制品。

5.4.3 分装完毕,应排出空气后密封。

5.5 记录

应及时将精液检验、精液稀释、精液分装的处理和结果填入精液质量检测登记表,登记表见附录C。

5.6 精液保存和运输

5.6.1 精液应置于22℃~25℃下1h~2h
后,平放入16℃~18℃恒温箱内避光保存;也可用12层~
15层纱布(或干毛巾)包严直接放入恒温箱内。

5.6.2 保存的精液每隔4 h~8h 摇动一次并记录,摇动时应轻缓均匀。

5.6.3
每批精液应留样备查。同批号的精液在有效期内应抽样检查并记录,常温精液保存登记表见附
录D。

5.6.4 常温精液产品质量和标志应符合GB 23238 的规定。

5.6.5
精液应置于16℃~18℃的恒温箱内避光运输,运输过程中避免强烈震动和碰撞。

GB/T 25172—2020

A

(资料性附录)

精液处理室配备仪器和用品

精液处理室配备仪器和用品见表 A.1。

A.1 精液处理室配备仪器和用品

名 称

规格(技术参数)

用 途

电子秤

3000 g/1 g,6000 g/2g

称量精液、稀释液

显微镜

40×~1600 ×

观测精子数、活力和畸形率

显微镜恒温板

室温~50℃(可调),工作面温差≤0.5℃

载玻片、盖玻片恒温预热

精子密度仪

50 mill/mL~1400 mill/mL

测定精子密度

pH计

测量范围0.0~14.0,精度±0.1

测定精液、稀释液的pH

恒温箱

16℃~18℃

保存精液

干燥箱

室温+5℃~250℃,波动度<±2℃

预热器皿和消毒用品

冰箱

冷藏室0℃~4℃

保存试剂和剩余稀释液

电子天平

200 g/0.01 g

称量化学试剂(选用)

恒温水浴锅

双孔或四孔

等温精液与稀释液

恒温磁力搅拌器

0℃~99℃,容量<500 mL

稀释液搅拌、加热

血球计数板

25×16

测定精子密度

计数器

0~999

精子计数

微量移液器

100μL~200μL

精液取样或稀释

微量移液器

100μL~1000μL

精液取样或稀释

量筒

1000 mL±5 mL

量取液体

三角瓶

1000 mL

配制稀释液

储水瓶

5 L

盛放配制用水

烧杯

1000 mL、2000 mL

精液稀释

热封口机

袋装精液封口

分装架

分装精液

载玻片

精子活力的测定

盖玻片

精子活力的测定

擦镜纸

擦拭显微镜镜头

移液枪吸嘴

200μL

精液取样或稀释

稀释剂

配制精液稀释液

GB/T 25172—2020

A.1 ( 续 )

名 称

规格(技术参数)

用 途

精液袋、瓶

分装及保存精液

温度计

0℃~60 ℃

测量精液、稀释液等温度

玻璃棒

稀释液配制或精液稀释

标签纸

精液、稀释液标签

GB/T 25172—2020

B

(资料性附录)

常见常温精液稀释液配方

常见常温精液稀释液配方见表B.1。

B.1 常见常温精液稀释液配方

成 分

配方一

配方二

配方三

配方四

保存时间/d

3

3

5

5

D-葡萄糖

37.15

60.00

11.50

11.50

柠檬酸三钠

6.00

3.70

11.65

11.65

EDTA钠盐

1.25

3.70

2.35

2.35

碳酸氢钠

1.25

1.20

1.75

1.75

氯化钾

0.75

0.75

青霉素钠

0.60

0.50

0.60

硫酸链霉素

1.00

0.50

1.00

0.50

聚乙烯醇(PVP,TypeⅡ)

1.00

1.00

三羧甲基氨基甲烷(Tris)

5.50

5.50

柠檬酸

4.10

4.10

半胱氨酸

0.07

0.07

海藻糖

1.00

林肯霉素

1.00

注:单位为克每升。

00

C

(规范性附录)

精液质量检测登记表

精液质量检测登记表见表 C.1。

C.1 精液质量检测登记表

采精

日期

采精

时间

品种

耳号

采精

外观

气味

采精量

mL

精子

活力

%

精子

密度

10°个/mL

精子

畸形率

%

稀释液

稀释后

精子活力

%

头份

质检

备注

品名

总量

mL

style="width:3.10002in" />

D

(规范性附录)

常温精液保存登记表

常温精液保存登记表见表D.1。

D.1 常温精液保存登记表

产品

名称

生产

单位

生产日 期及

时间

批号

品种

耳号

头份

每头份

有效期

h

保存第1d

保存第2d

保存第 …d

出厂前

精子活力

%

质检员

备注

总精 子数

10°个

精子

畸形率

%

剂量

mL

精子

活力

%

摇动

时间

精子

活力

%

摇动

时间

精子

活力

%

摇动

时间

\<0

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